酶动力学基本参数

米氏方程

1902 年 Victor Henri 提出了酶- 底物中间复合物学说，认为首先是酶 E 与底物 S 生成酶-底物 中间复合物 ES，然后 ES 分解生成产物 P 和游离的酶。

\[ \ce{E + S <=>[k_1][k_2] ES ->[k_3] E + P} \]

式中的 \(k_{1}\)、\(k_{2}\) 和 \(k_{3}\) 分别为各向反应的速率常数。

色谱柱基本结构

Figure 1. 液相色谱柱

常见的 HPLC 色谱柱由不锈钢柱体和两端的筛板（frit），以及柱内填料组成。两端的筛板主要防止填充颗粒流失和色谱柱堵塞；对于分配色谱，填料通常以硅胶颗粒作为载体，在硅胶表面键合有固定相。

假设检验方法选择思维导图

2025.05.11

基于目前个人对统计学的理解，做了一个假设检验方法选择的思维导图。目前仅是从采集的数据类型切入的，对于假设检验方法的选择应该还是比较直观易懂。

如果是从自变量和因变量角度来看，如单因素方差分析，可以看作分类数据自变量对定量数据因变量的影响，因此也就能将“回归相关”纳入到一个更大体系里。后面可能也出一版这样的思维导图。

基础知识

统计学的研究内容

统计学是关于数据资料的收集、整理、分析和推断的一门科学。它可分为描述统计学和推断统计学两大类。

描述统计学是研究数据收集、处理、描述及可视化的统计学方法，其内容包括如何取得研究所需要的数据，如何用图表形式对数据进行处理和展示，如何通过对数据的综合、概括与分析，得出所关心的数据特征。如果在研究中可以得到整个总体的数据，那么描述统计学就足够了。

但是，实际中往往只能得到总体的一小部分（称为样本），这就需要通过这些样本的有限的样本信息来推断有关总体特征，这就是推断统计学的研究领域，又分为参数估计和假设检验。

血球计数板

血球计数板用优质厚玻璃制成，通过 H 形凹槽分为两个相同的计数池。每个计数池的两侧都有一个支持柱，上面覆盖着特制的盖玻片，形成高度为 0.10 mm 的计数池。

计数池内划分为长和宽各为 3 mm 的方格，总共分为 9 个大方格。每个大格面积为 1.0 mm，体积为 0.1 mm³，即一个大方格的体积是 0.1 μL。

转膜

材料

• 转印缓冲液（含有 20% 甲醇的 1X Tris-甘氨酸缓冲液）

甲醇能减少凝胶的膨胀并提高蛋白质与硝酸纤维素膜的结合效率。转膜效率受以下因素影响：电泳缓冲液中是否存在 SDS、转膜缓冲液的 pH 及转膜前凝胶中的蛋白质是否已染色。为最大限度地提高转膜效率，SDS 的浓度不应超过 0.1%，转膜缓冲液 pH 必须 ≥8.0。

SDS-PAGE 凝胶制备

材料

• 30% 丙烯酰胺/N,N'-亚甲基双丙烯酰胺混合液（29∶1, m/m）
• 10% 过硫酸铵（APS, m/V）
• 10% SDS 溶液
• 四甲基乙二胺（TEMED）
• 1.5 M Tris-HCl（pH8.8）
• 1.0 M Tris-HCl（pH6.8）
• 去离子水
• 异丙醇（或 70% 乙醇或水饱和丁醇）

设备

• 垂直电泳槽

细胞裂解和蛋白提取

材料

• 哺乳动物悬浮或单层生长的细胞样品或组织样品
• 裂解缓冲试剂
• 蛋白酶抑制剂 Cocktail（如品牌：YEASEN InStab™，货号/型号：20124ES03）
• 磷酸酶抑制剂 Cocktail（如品牌：YEASEN InStab™，货号/型号：20109ES05）

设备

• 高效匀浆器（匀浆组织时选用）
• 高速冷冻离心机

总 RNA 提取

材料

• 悬浮或单层生长的细胞样品或组织样品
• 氯仿或1-溴-3-氯丙烷（氯仿，品牌：Greagent，型号/货号：G75915B）

溴氯丙烷是一种可取的氯仿替代物，因为它毒性更小且不易挥发。此外，溴氯丙烷可以提供更好的液相分离，从而更好地从总 RNA 中去除基因组 DNA，获得更纯的 RNA。

• 异丙醇（异丙醇，品牌：Greagent，型号/货号：G75885B）
• 糖原（20 mg/mL 储存液）（可选）
• 无 RNase 的水（DEPC 水，品牌：Beyotime，型号/货号：R0022）
• 乙醇（无水乙醇，品牌：Greagent，型号/货号：G73537AC）
• 75% 乙醇（用无水乙醇和 DEPC 水配制）
• 单相裂解试剂（如 TRIzol）（TriQuick Reagent 总 RNA 提取试剂，品牌：Solarbio，型号/货号：R1100）
• 磷酸盐缓冲液（PBS）（1X）（PBS 缓冲液，品牌：Solarbio，型号/货号：P1020）

1. 每周更新一篇推文，保持写作和记录习惯；
2. 合理安排时间，早睡早起，每周至少 4 天在 24:00 前睡觉；
3. 必须参加 IELTS，并 ≥ 7.0；
4. 对专业知识有系统的了解，对相关法规有较全面的认识；
5. 锻炼，控制 BMI ≤ 22.0；
6. 系统学习摄影知识；
7. “宁可痛苦，不要麻木”，常留点时间思考，静下心来看几本书和几部电影；
8. 多向外索取，表达是方式，而不是目的；
9. 及时行动，勇敢不要犹豫。