使用血球计数板进行细胞计数
血球计数板
血球计数板用优质厚玻璃制成，通过 H 形凹槽分为两个相同的计数池。每个计数池的两侧都有一个支持柱，上面覆盖着特制的盖玻片，形成高度为 0.10 mm 的计数池。
计数池内划分为长和宽各为 3 mm 的方格，总共分为 9 个大方格。每个大格面积为 1.0 mm，体积为 0.1 mm3，即一个大方格的体积是 0.1 μL。
细胞计数操作
一般操作流程
用酒精清洁计数池和盖玻片。待计数池和盖玻片干燥后，将盖玻片放在预定位置。
收集细胞。将 10 μL 细胞加到血球计数器上。不要使细胞溢出。
将计数池置于倒置显微镜下，使用合适的倍镜观察细胞。
根据细胞数量（每个方格细胞数量在 20–50 个较合适），可以选择不同的计数区域，对于位于边线或交界处的细胞/细胞团，遵循“计上不计下，计左不计右”的规则：
- 对四个角大方格（4 个蓝色方框）内细胞总数 N 计数，则细胞密度 c (cells/mL) 为：
\[ c = \frac{N}{4}\times10^4 \]
- 或者中间大方格内四角及中间小方格（5 个红色阴影）内细胞总数 N 计数，则细胞密度 c (cells/mL) 为：
\[ c = N\times5\times10^4 \]
上述公式用一句话理解就是，一个大方格的体积是 0.1 μL，即 10-4 mL，先换算成一个大方格的细胞数量（n），再计算细胞密度（n 万/mL）。
使用台盼蓝对活细胞计数计算细胞存活率
台盼蓝（Trypan Blue）是一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（透明无色）和死细胞（蓝色） 鉴别开来。
注意事项
- 细胞计数前，需要用生理盐缓冲液或者无血清培养基对细胞进行充分的清洗，因为细胞对血清蛋白具有非常高的亲和力，因此残留的血清蛋白会导致较暗的染色背景。
操作
- 细胞悬液与 0.4% 台盼蓝溶液以适当比例混匀，台盼蓝终浓度 0.4%–0.04%（如 10 μL 细胞悬液 + 80 μL 无血清培养基 + 10 μL 0.4% 台盼蓝溶液），染色时间控制在 3 min 左右。
注：台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数；也有说染色 3 min 时间已经足够，染色时间可以更长一些，但不宜超过 10 min。
- 按上述细胞计数操作计数后：
\[ 细胞存活率\ (\%)= \frac{活细胞总数}{(活细胞总数+死细胞总数)}\times100%。 \]