改性剂应该加在水相还是有机相？

发表于 Waline：

为了避免在梯度洗脱水相和有机相混合过程中，改性剂（缓冲盐、离子对试剂等）浓度的变化，造成基线漂移或体系不稳定，改性剂最好同时加入到水相和有机相中，且浓度保持一致。

  • 对于 UV 检测器，一些缓冲盐在低波长仍有末端吸收，因此改性剂浓度的变化，可能造成背景吸光度的漂移。
  • 在 MS 中，特别是在使用 ESI 离子源时，缓冲盐浓度变化，会改变分析物离子响应。由于液滴表面能容纳的电荷有限，过高的缓冲盐浓度会抑制分析物离子在液滴表面浓度，造成响应下降1。
  • 在离子对色谱中，离子对试剂需要在硅胶颗粒表面形成一层动态稳定的薄层，因此离子对色谱往往需要很长的平衡时间，离子对色谱浓度的变化，会造成已经平衡的体系被破坏2。

但某些改性剂（如无机缓冲盐）在有机相中溶解度较差，是否在有机相中添加需要权衡，或者在有机相中加入一定水溶液。在 HPLC-UV 中，常出现仅在水相中添加磷酸盐调节 pH，主要是考虑磷酸盐几乎没有紫外吸收，其浓度改变不会造成基线漂移（但需注意缓冲盐在有机相中的电离与水相不同，使用有机相稀释缓冲盐溶液，其 pH 仍可能会发生改变）。2

References

  1. Enke C G. A Predictive Model for Matrix and Analyte Effects in Electrospray Ionization of Singly-Charged Ionic Analytes[J]. Analytical Chemistry, 1997, 69(23): 4885-4893.

  2. Lloyd R. Snyder, Joseph J. Kirkland, John W. Dolan. 现代液相色谱技术导论[M]. 人民卫生出版社, 2012.